关键字：APOL1蛋白，mRNA，肾，非软骨组织，原代细胞，永生细胞系

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简介： 摘要
虽然APOL1基因变异与非洲裔美国人的肾病有关，但对APOL1蛋白的合成，摄取和肾细胞定位知之甚少。为了解决这些问题，我们检测了人肾和人肾来源细胞系中的APOL1蛋白和mRNA定位。间接免疫荧光显微镜对来自肾功能正常人的非患病肾切除术冷冻切片进行，显示APOL1蛋白在足细胞中显着富集（与synaptopodin和Wilms'肿瘤抑制因子共定位），并且在肾小管细胞中存在较低的丰度。荧光原位杂交检测肾小球（足细胞和内皮细胞）和肾小管中的APOL1 mRNA，与这些细胞类型中的内源性合成一致。当这些分析扩展到肾源细胞系时，定量RT-PCR未检测到人肾小球系膜细胞中的APOL1 mRNA;然而，在近端小管细胞和肾小球内皮细胞中观察到大量APOL1 mRNA，足细胞.Western印迹分析揭示了这些细胞系中相应水平的APOL1蛋白。为了解释在冷冻切片中观察到的肾足细胞中标记的丰富的APOL1蛋白与足细胞系中较少丰度之间的明显差异，我们探索了APOL1细胞摄取。 APOL1蛋白在体外容易被人足细胞摄取，但不被肾小球系膜细胞，肾小球内皮细胞或近端小管细胞有效摄取。我们假设人冷冻切片足细胞中较高水平的APOL1蛋白可能反映内源性蛋白质合成和来自循环或肾小球滤液的APOL1摄取。