关键字：2009年，肾脏病学分会，大连年会

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简介： A32  PI3K/AKT通路在12/15-脂氧化酶引起的系膜细胞病变中的作用研究
目的：通过观察12/15-脂氧化酶（12/15-LO）代谢产物12(S)-HETE对PI3K-AKT-Foxo3a信号传导通路的活化作用，探讨12/15-LO对MnSOD、Bim基因表达调控的作用，对细胞凋亡与氧化应激的影响以及对TGF--Smad信号途径的影响机制，揭示其参与糖尿病肾脏病理改变的发生机制。方法：本实验选用肾小球系膜细胞为研究对象，动物实验选择雄性SD大鼠，应用腹腔注射链脲佐菌素（STZ，65mg/kg）的方法诱导1型糖尿病模型。将12(S)-HETE（10-7M）加入培养液中刺激不同时间，利用蛋白印迹杂交（western blot）法检测AKT、Foxo3a蛋白和磷酸化水平；利用竞争性定量PCR法检测MnSOD、Bim、FN、collagen等基因的表达水平。利用免疫荧光技术观察12(S)-HETE 对Foxo3a细胞核内迁移的影响；同时通过免疫组化技术对照观察糖尿病与非糖尿病大鼠肾脏内磷酸化的Smad、AKT、Foxo3a蛋白的分布情况。将提取的总DNA进行凝胶电泳，观察细胞凋亡的变化。