关键字：中华医学会肾脏病学分会，2018年，血液净化论坛

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简介： BMP-2 在碱性环境中对大鼠血管平滑肌细胞钙化的作用
徐金升,郭利萍,张胜雷,崔立文
河北医科大学第四医院
目的：血管钙化在血液透析患者中很常见，且患者在透析过程中使用碳酸氢盐透析液，使机体处于碱性环境中。本实验通过调整培养基 pH 值，探讨 BMP-2 在碱性环境中对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells， VSMCs)钙化的作用。
方法：选取 60-80g 健康雄性 SD 大鼠，采用组织块贴壁法建立 VSMCs 原代培养细胞系，并经细胞形态学和 α-平滑肌肌动蛋白（ α-SMA）免疫组化染色鉴定。将细胞随机分为对照组、高磷组、碱干预组和抑制剂组，其中对照组的细胞用正常培养基（ pH7.4）进行培养，高磷组的细胞用含有10mmol/Lβ 甘油磷酸的培养基（pH7.4）进行培养，碱干预组的细胞用含有 10mmol/Lβ 甘油磷酸的培养基并将 pH 值调至 7.7 进行培养，抑制剂组的细胞在碱干预组培养基中加入 BMP-2 抑制剂500ng/ml Noggin 进行培养。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况，酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性， Western 印迹法检测骨形态发生蛋白 2（ bone morphogenetic protein 2， BMP⁃2）、 Runt 相关转录因子 2（Runx2）蛋白的表达，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测 BMP-2、 Runx2 mRNA 的表达。应用 SPSS17.0 软件进行统计学分析，结果以均数±标准差表示，两组及多组之间的比较符合独立、正态、方差齐采用独立样本 t 检验及方差分析，不符合者采用非参数检验，以 P<0.05 为有统计学意义。